本文標(biāo)題："高解析的低溫免疫金電子顯微鏡技術(shù)的應(yīng)用"
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高解析的低溫免疫金電子顯微鏡技術(shù)的應(yīng)用
低溫免疫金電子顯微鏡技術(shù)
運(yùn)用高解析的低溫免疫金電子顯微鏡技術(shù)定位亞細(xì)胞蛋白質(zhì)／
抗原，此方法可在超微水平上進(jìn)行局部解剖生化的研究。
運(yùn)用這種方法最常遇到的染色困難是低質(zhì)量的切片，缺乏特異
性標(biāo)記，背景著色深，假陽(yáng)性，對(duì)比弱。差的切片通常由于標(biāo)本制
備不當(dāng)或冰凍切片機(jī)不穩(wěn)定。非特異性標(biāo)記是由于在乙醛固定之后
抗體不能識(shí)別抗原；特異性標(biāo)記最理想的對(duì)照是在一類不表達(dá)目標(biāo)
抗原的細(xì)胞中過表達(dá)該抗原。假陽(yáng)性常常在運(yùn)用雙標(biāo)記時(shí)出現(xiàn)。在
這種情況下，金顆粒的兩側(cè)粘連在一起，之間距離小于20nrn，這
樣常常被誤認(rèn)為是只定位。柵格上的污點(diǎn)常常由試劑的磷酸化污染
引起。另外，在免疫孵育過程中切片干燥也會(huì)產(chǎn)生污點(diǎn)。
相關(guān)的視頻光學(xué)／電子顯微鏡術(shù)基本方案
這種方法采用免疫金染色法和免疫過氧化物酶染色法來做電鏡
標(biāo)本的染色。通常免疫金染色法常用來標(biāo)記絕大部分抗原；而免疫
過氧化物酶染色法通常僅用來標(biāo)記那些位于膜包被的小間隔內(nèi)的抗
原，這是因?yàn)檫^氧化物酶反應(yīng)生成的電子致密產(chǎn)物易從抗體結(jié)合處
彌散開。只有采用免疫金染色法才能標(biāo)記位于胞質(zhì)內(nèi)的GFP融合蛋
白質(zhì)的抗原決定簇。此外，HRP(辣根過氧化物酶)標(biāo)記也適用于其
他的抗原決定簇。
值得一提的是，許多用免疫熒光顯示結(jié)果非常好的抗體在免疫
源性電鏡染色中不甚理想，因?yàn)樵诙鄶?shù)電鏡標(biāo)本的固定過程中用到
的戊二醛很容易與抗原決定簇中的氨基酸基團(tuán)橋聯(lián)到一起；然而，
若是減少或者不用戊二醛會(huì)造成細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器的超微結(jié)構(gòu)無法很好
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